practica de coliformes fecales y coliformes totales

Alumno
Gerardo Barriga Ramirez

Profesor
jose Peña Manjarrez


Practica
coliformes fecales y coliformes totales


laboratorista ambiental 3ª

Método para la determinación de bacterias coliformes, coliformes

fecales y Escherichia coli por la técnica de diluciones en tubo

múltiple (Número más Probable o NMP

OBJETIVO:

Diferenciar los organismos coliformes totales de los microorganismos

coliformes fecales.

 Evaluar la calidad sanitaria de muestras de agua mediante la

búsqueda de microorganismos coliformes totales, coliformes fecales y escherichia coli .

Introducción :

Debido a que un gran número de enfermedades son transmitidas por vía fecal-oral

utilizando como vehículo los alimentos y el agua, es necesario contar con

microorganismos que funcione como indicador de contaminación fecal.
Estos

deben de ser constantes, abundantes y exclusivos de la materia fecal, deben tener

una sobrevivencia similar a la de los patógenos intestinales y debe de ser capaces

de desarrollarse extra intestinalmente.
en métodos aeróbicos se desarrollan a temperaturas de 35 c a 37 c +- 1c.
fermentan la lactosa produciendo gas y acido lacto.

Coliformes fecales :

 poseen las mismas propiedades de los coliformes pero no son termo tolerantes y pueden fermentar la lactosa a 44 c.

Escherichia coli:

coliforme termotolerante que produce indol en presencia de trittofeno de esta se derivan varias infeciones por ella nombrada coliformes.

Determinacion  por el numero mas probable
La determinación de microorganismos coliformes totales por el método del

Número más Probable (NMP), se fundamenta en la capacidad de este grupo

microbiano de fermentar la lactosa con producción de ácido y gas al incubarlos a

35°C ± 1°C durante 48 h., utilizando un medio de cultivo que contenga sales

biliares. Esta determinación consta de dos fases, la fase presuntiva y la fase

confirmativa.

En la fase presuntiva el medio de cultivo que se utiliza es el caldo lauril sulfato de

sodio el cual permite la recuperación de los microorganismos dañados que se

La determinación del número más probable de microorganismos coliformes

fecales se realiza a partir de los tubos positivos de la prueba presuntiva y se

fundamenta en la capacidad de las bacterias para fermentar la lactosa y producir

gas cuando son incubados a una temperatura de 44.5 ± 0.1°C por un periodo de

24 a 48 h.

La búsqueda de Escherichia coli se realiza a partir de los tubos positivos de caldo

EC, los cuales se siembran por agotamiento en medios selectivos y diferenciales

Procedimiento
Antes que nada se debe esterilizar materiales y reactivos
a 110c a 15 libras de presión por 15 minutos se debe preparar una solución de caldo lactosado tomar las variantes de tubos de ensaye y un numero igual de tubos Durham colocarlos dentro de los tubos de ensaye llenarlos de caldo lactosado solo por encima delos tubos Durham en tres concentraciones de muestra

Incubar por 24 a 48 horas a 36 c. después de eso se toma una muestra para reincubar los tubos positivos a 44c por 48 horas

Tomar apuntes de de cuales tubos tuvieron presencia de gas osea ubo una fermentación y anoatar los resultados
y con la ayuda de una tabla de 3 calcular en nmp de coliformes totales fecales

Resultados
se obtuvieron 8 tubos positivos en la primera siembra 3 de 0.1 3 de 10 y 2 de 1 ml.(caldo lactosado).
en la segunda siembra se dieron 3 de 10 2 de 0.1 y 1 de 1 ml (escherichia coli).